关键词：污染 工程 监测 环境 测定
原理：
培养前测溶解氧，另一水样在20±1℃的恒温箱内培养5天后再测溶解氧，两次溶解氧的差值即为BOD5。
仪器
恒温培养箱(20±l℃)，5—20升细口玻璃瓶，曝气装置，虹吸管，1000mL量筒，玻璃搅拌棒，溶解氧瓶。
试剂
1. 磷酸盐缓冲溶液：称取8.5gKH2P04，21.75gK2HP04，33.4gNa2HP04·7H20及1.7gNH4C1溶于1000mL去离子水中，稀释至1000mL,此溶液的pH值为7.2不用再调整。
2. 硫酸镁溶液：称取22.5gMgS04·7H20溶于去离子水中，稀释至1000mL。
3. 氯化钙溶液：称取27.5g无水CaCl2溶于去离子水中，稀释至1000mL。
4. 氯化铁溶液：称取0.25gFeCl3·6H20溶于去离子水中, 稀释至1000mL。
5. 葡萄糖—谷氨酸标准溶液：将葡萄糖和谷氨酸在105℃烘1h后，各称取150mg溶于去离子水中，移入1000mL容量瓶中并稀释至标线。
6. 测定溶解氧的全套试剂，
7. 稀释水：多数污水进行BOD5测定时要进行稀释培养，必须使用稀释水进行培养。稀释水的制备如下：在20L细口玻璃瓶中装入一定量的去离子水，用真空泵或无油空气压缩机曝气2—8h以上。取稀释水测定其中的溶解氧的含量，达到8—9mg／L时停止曝气。在20℃温度下放置一段时间，以便使溶解氧在水中含量成为稳定状态。使用前在每升稀释水中加入磷酸盐缓冲溶液、 MgS04溶液、 CaCl2溶液、 FeCl3溶液各1mL。用玻璃搅拌捧混合均匀后，用溶解氧瓶分别取满两瓶稀释水供测定和培养用。
8. 接种液：可用生活污水于20℃放置24—36h后的上清液为接种液。对某些特殊工业废水最好用专门驯化过的菌种为接种液，这种驯化的微生物种群最好从接受该种废水的水体中取得。
9. 接种稀释水：当测定难降解有机物BOD5时需要用接种稀释水进行稀释。在每升稀释水中加入1——3mL接种液搅拌均匀。用溶解氧瓶装满两瓶接种稀释水供测定和培养用。
步骤
1. 水样预处理：在测定前水样若pH值过高或过低、含有少量游离氯、含过饱和溶解氧及有毒物质等均需预处理后再进行测定。
2. 不经稀释水样的测定：溶解氧含量高、有机物含量较少的地面水，可以不经稀释，直接用虹吸管将混合均匀的水样虹吸入两个溶解氧瓶中(在虹吸过程中不能损失或带入溶解氧)，水样注满溶解氧瓶并溢出少许，加塞。其中一瓶立刻测定溶解氧，另一瓶加满水封后，放入培养箱，在20±1℃培养5天，培养过程中注意添加水封，从开始放入培养箱算起，经过五昼夜后，取出测定剩余的溶解氧。
3. 经稀释水样的测定
(1)确定稀释比：稀释比的确定在BOD5测定中是十分重要的因素，如果稀释比选择不适，不在合适的范围内，培养五天后水样中剩余的溶解氧太多或太少都不能得到可靠的结果。最佳稀释比应该是稀释水样培养五天后的溶解氧减少量在40—70％之间。因此，一般要求稀释水样培养五天后的溶解氧至少还有1mg/L，而培养期间溶解氧损失至少应该在2mg／L以上。对于普通的污水和废水，先测出高锰酸盐指数，然后按这数值的2—4倍估计水样的BOD5值的可能范围，根据下表的数值查得适宜的稀释比，以这个稀释比为中心，选取3—4个稀释比对水样进行稀释。
表 BOD5与试验稀释比
|
BOD5范围(mg/L) |
稀释比（%） |
BOD5范围(mg/L) |
稀释比（%） |
|
20000—70000 |
0.01 |
100—350 |
2.0 |
|
10000—35000 |
0.02 |
40—140 |
5.0 |
|
4000—14000 |
0.05 |
20—70 |
10 |
|
2000—7000 |
0.1 |
10—35 |
20 |
|
1000—3500 |
0.2 |
4—14 |
50 |
|
400—1400 |
0.5 |
0—7 |
100 |
如果缺乏上面估计方法的条件，根据经验：浓的工业废水用0.01一1.0％，未经处理或已沉淀的城市污水用l一5％，经生化处理后的出水用5—25％，污染的河水用25—100％。
(2)水样的稀释：水样稀释可采用直接稀释法或量筒稀释法。
1) 直接稀释法：就是在溶解氧瓶中直接稀释。首先要知道溶解氧瓶的容积。将瓶灌满水后，盖塞，倒去水封，用量筒测定每一个瓶中水的体积，贴上标签。每一个溶解氧瓶的塞子和瓶配套使用，不得弄错。用虹吸管先装入1／3版稀释水(或接种稀释水)，然后加入根据瓶的容积和稀释比计算出的水样量，再用稀释水(或接种稀释水)将瓶刚好装满，不留气泡，盖塞后又不溢出为好，然后加满水封。同一稀释比配制两瓶。用同样的方法将3—4个稀释比的稀释水样配制好，盖塞，加满水封。
2) 量筒稀释法：用虹吸法沿量筒壁先加入1／3稀释水(或接种稀释水)在量筒中，然后按选定的稀释比，加入所需的一定量混合均匀的水样，再用稀释水(或接种稀释水)加至lO00mL刻度，小心搅拌均匀，用虹吸吸法分装在两个溶解氧瓶中。用同样方法配制3—4个不同稀释比的稀释水样，盖塞，加满水封。稀释水样配制好后每一稀释比的两瓶稀释水样，连同前面取好的两瓶稀释水(或接种稀释水)，一瓶留下立刻测定其当天的溶解氧，另一瓶放入培养箱，在20±1℃下培养五天。培养过程中要经常观察温度，加满水封，五天后取出测定溶解氧。
4. 葡萄搪—谷氨酸标准溶液的测定：为检验稀释水和接种液的性质及测定人员的操作技术，可配制稀释比为2％的葡萄糖—谷氨酸标准溶液的稀释水样。按经稀释水样的测定步骤进行(用接种稀释水进行稀释)。测得BOD5值应在180—230mg/L之间，否则，应检查稀释水、接种液的质量或操作技术是否存在问题。
计算
式中，c1一稀释试样培养前的溶解氧， mg／L; c2一稀释试样培养五天后的溶解氧， mg/L； B1一稀释水(或接种稀释水)培养前的溶解氧， mg/L；B2一稀释水(或接种稀释水)培养五天后的溶解氧， mg／L; f—稀释水用量在稀释试样中所占的百分数，以小数表示； P一水样用量在稀释试样中所占的百分数，以小数表示。
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